什么是ELISA--原理與分類(lèi)

一、基本原理 1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開(kāi)始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。 這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗

2022-05-23

內(nèi)參抗體怎么選

內(nèi)參抗體可用于評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類(lèi)對(duì)照可幫助確定樣品間表達(dá)水平的差異，以判斷是由細(xì)胞裂解物的實(shí)際蛋白水平導(dǎo)致，還是由上樣量的差異導(dǎo)致。 內(nèi)參抗體主要功能 （1）檢測(cè)整個(gè)WB流程是否正常 （2）檢測(cè)基因表達(dá)產(chǎn)物是否正確 （3）比較產(chǎn)物微量的相對(duì)變化 （4）評(píng)價(jià)各個(gè)上樣孔內(nèi)蛋白的總量是否基本一致 圖一示例 內(nèi)參抗體在目標(biāo)蛋白的免疫熒光研究中，也可以作為共染的陽(yáng)性對(duì)照。內(nèi)參抗體分為未標(biāo)記型和標(biāo)記型，標(biāo)記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。

2022-05-11

ELK Biotechnology歸納Elisa實(shí)驗(yàn)中樣本的制備與保存

樣品收集注意事項(xiàng) 1. ? 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝 （ELK Biotechnology單指標(biāo)夾心法試劑盒，單孔標(biāo)準(zhǔn)上樣量為100μl?），凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，或-80℃(3個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，避免反復(fù)凍融。融化樣本在試驗(yàn)前請(qǐng)?jiān)俅坞x心以去除凍融后可能出現(xiàn)的沉淀物。 2. ? 試劑盒檢測(cè)范圍不等同于樣本的濃度范圍，如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議查閱文獻(xiàn)后先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。 3. ? 若所檢樣本不在說(shuō)明書(shū)所列樣本之中，建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其檢測(cè)有效性。

2022-05-04

通過(guò)兩種軟件計(jì)算ELISA結(jié)果

方法一：使用Curve  Expert1.4軟件（點(diǎn)擊下載Curve  Expert1.4） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制  可以采用各種繪圖軟件來(lái)繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，下面以“Curve  Expert1.4”軟件為例，繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法如下； 1．啟動(dòng)“Curve  Expert” 2．X軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白值），Y軸輸入所對(duì)應(yīng)的濃度值，如圖： 3．單擊[運(yùn)行]  按鈕，出現(xiàn)如下對(duì)話框 4．單擊[ok

2022-05-04

ELISA實(shí)驗(yàn)操作視頻

2022-04-26

Westernblot實(shí)驗(yàn)蛋白提取

貼壁細(xì)胞總蛋白提取： 用TBS緩沖液潤(rùn)洗貼壁細(xì)胞2-3次，最后一次盡量吸干殘留液。加入適當(dāng)體積的細(xì)胞總蛋白提取試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)于培養(yǎng)板/瓶?jī)?nèi)裂解3-5min。期間反復(fù)晃動(dòng)培養(yǎng)板/瓶，使試劑與細(xì)胞充分接觸。用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞及試劑刮下，收集到1.5mL離心管中。冰浴30min，期間用移液器反復(fù)吹打，確保細(xì)胞完全裂解。4℃13000g離心5min，收集上清，即為總蛋白溶液。 懸浮細(xì)胞總蛋白提?。? 低速離心收集細(xì)胞，加入適當(dāng)體積的冷卻的PBS緩沖液重懸，2000rpm離心10min，吸除上清。重復(fù)以上操作兩次，收集細(xì)胞沉淀。加入適當(dāng)體積的細(xì)胞總蛋白提取試劑(使用

2021-08-14

引物干粉使用說(shuō)明

(1)引物干粉開(kāi)蓋前13000rpm，室溫離心1min。 (2)加入管壁上10倍nmole數(shù)值的水(μL)的DEPC水，渦旋混勻，瞬時(shí)離心。此為引物儲(chǔ)備液(100μM)，用后于-20℃保存。 *引物管上一般是3.0~6.0nmole，加入十倍這個(gè)數(shù)值微升的水(30~60μL)。 (3)取一新1.5mL EP管，加入380μLDEPC水，上下游引物儲(chǔ)備液各吸取10μL于新EP管中，渦旋混勻，瞬時(shí)離心。此為引物工作液(2.5μM)，可直接用于實(shí)驗(yàn)，用后于4℃保存。

2021-08-14