方法一：使用Curve  Expert1.4軟件（點擊下載Curve  Expert1.4）

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 

可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，下面以“Curve  Expert1.4”軟件為例，繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法如下；

1．啟動“Curve  Expert”

2．X軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白值），Y軸輸入所對應(yīng)的濃度值，如圖：

3．單擊[運行]  按鈕，出現(xiàn)如下對話框

4．單擊[ok]按鈕，出現(xiàn)如下兩個對話框，關(guān)閉下面一個對話框

5. 在對話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱，從“1”開始依次點擊曲線名稱，在右下角會出現(xiàn)相應(yīng)擬合的曲線。

（一般選擇第一個多項式擬合）

6. 根據(jù)擬合的曲線選取ELISA擬合度最佳的曲線雙擊，出現(xiàn)如下對話框：

注意：選擇系數(shù)（即“r”值）最好的曲線方程來進行運算。在下面的對話框

右上角有“r”值 ，當(dāng)“r”值越接近1擬合度越好

7．按[Ctrl]鍵+[L]鍵，出現(xiàn)如下對話框：

8．輸入標(biāo)準(zhǔn)的OD值，單擊[Calculate]按忸，即可得到待測蛋白的實際含量（標(biāo)本稀釋了N倍，運算出的數(shù)值應(yīng)在乘以N）。

9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程，可在步驟6的對話框空白處右擊，選擇”Information”

10. 得到如下對話框：點擊“Copy”

在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù)：

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)

Coefficient Data:

a =   -21.531017

b =  212.05019

c =  -0.24054479

d =  0.018060778

11. 修改作圖中X,Y坐標(biāo)軸高度以及相關(guān)屬性

選擇步驟9所示圖中的第二排“Graph Properties”，修改好后點擊OK保存

方法二: 使用OriginPro 2021軟件計算競爭法試劑盒ELISA結(jié)果

第一步：我們以PG(Progesterone) ELISA Kit 這個試劑盒為例

將標(biāo)曲的數(shù)據(jù)復(fù)制粘貼在如下表框中

按下Ctrl+A鍵全選然后鼠標(biāo)依次單擊，Analysis---Fitting---Nonlinear Curve Fit---Open Dialog...

在Function Selection選項卡中，將 Category 參數(shù)設(shè)置為 Statistics

將Function參數(shù)設(shè)置為 Logistic

在Find X/Y選項卡中對 Find X from Y 進行勾選，然后單擊 Fit 鍵

橫縱坐標(biāo)選擇Log10參數(shù)，注意from / to 的上下限值的選擇，完成后單擊OK 鍵

最后結(jié)果計算，競爭法由于OD值與樣品濃度成反比關(guān)系，所以不需要減去零孔背景值，如果是夾心法的試劑盒，則還需要事先在excel中減去背景值然后再依據(jù)教程進行計算。