微信掃一掃立即咨詢
曲線繪制的使用工具
以下所述中使用的曲線繪制軟件為Curve E xpert1.4, 各位老師們?nèi)缬行枰纯?span style="font-family:微軟雅黑;">點擊此鏈接下載自行下載使用;
?
可以采用各種繪圖軟件來繪制 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線,下面以“Curve Expert1.4”軟件為例,繪制 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法如下;
1.啟動“Curve Expert”
2.X 軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值(雙抗夾心輸入 OD-空白值),Y 軸輸入所對應(yīng)的濃度值,如圖:
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
3.單擊[運行]按鈕,出現(xiàn)如下對話框
4.單擊[ok]按鈕,出現(xiàn)如下兩個對話框,關(guān)閉下面一個對話框
5. 在對話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱,從“1”開始依次點擊曲線名稱,在右下角會出現(xiàn)相應(yīng)擬合的曲線。(一般選擇第一個多項式擬合)
6. 根據(jù)擬合的曲線選取 ELISA 擬合度最佳的曲線雙擊,出現(xiàn)如下對話框:注意:選擇系數(shù)(即“r”值)最好的曲線方程來進行運算。
在下面的對話框 右上角有“r”值,當(dāng)“r”值越接近 1 擬合度越好
7.按[Ctrl]鍵+[L]鍵,出現(xiàn)如下對話框:
8.輸入標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值,單擊[Calculate]按忸,即可得到待測蛋白的實際含量(標(biāo)本稀釋了 N 倍,運算出的數(shù)值應(yīng)在乘以 N)。?
9. 如想得到 ELISA 擬合曲線的方程,可在步驟 6 的對話框空白處右擊,選擇”Information”
10. 得到如下對話框:點擊“Copy”
在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù):
Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)?
Coefficient Data:?
a = -21.531017?
b = 212.05019?
c = -0.24054479 d = 0.018060778?
11. 修改作圖中 X,Y 坐標(biāo)軸高度以及相關(guān)屬性 選擇步驟 9 所示圖中的第二排“Graph Properties”,修改好后點擊 OK 保存
做標(biāo)準(zhǔn)曲線時有幾個問題需要注意
1、樣品的濃度是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的,所以要嚴(yán)格按照說明書指示進行操作,標(biāo)準(zhǔn)曲線能直接反映操作是否準(zhǔn)確。
2、樣品濃度較高時,應(yīng)當(dāng)稀釋樣本再進行檢測,樣品OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)才能得到更準(zhǔn)確的計算結(jié)果。
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點(除去零孔/背景孔),但至少要保證有5個點,當(dāng)標(biāo)曲有個別孔讀數(shù)值不正常時,可以摳除。
注意事項四
4、夾心法的標(biāo)曲制作和樣本濃度計算時需要減掉0孔背景值,競爭法不需要。
5、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎?,但一般來說,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.99,R值越接近1,說明標(biāo)曲擬合越好。
?
關(guān)注微信公眾號
微信掃一掃立即咨詢
微信掃一掃立即咨詢