內(nèi)參抗體可用于評價蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類對照可幫助確定樣品間表達(dá)水平的差異，以判斷是由細(xì)胞裂解物的實(shí)際蛋白水平導(dǎo)致，還是由上樣量的差異導(dǎo)致。

內(nèi)參抗體主要功能

（1）檢測整個WB流程是否正常

（2）檢測基因表達(dá)產(chǎn)物是否正確

（3）比較產(chǎn)物微量的相對變化

（4）評價各個上樣孔內(nèi)蛋白的總量是否基本一致

圖一示例

內(nèi)參抗體在目標(biāo)蛋白的免疫熒光研究中，也可以作為共染的陽性對照。內(nèi)參抗體分為未標(biāo)記型和標(biāo)記型，標(biāo)記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。

內(nèi)參抗體種類很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、LaminB、PCNA等，對不同樣本選擇不一樣的內(nèi)參抗體也是WB實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。本文將簡單介紹選擇內(nèi)參抗體應(yīng)遵循的五項(xiàng)原則：

一、樣本種屬來源：

首先要考慮實(shí)驗(yàn)樣本來源于什么物種。

1. 哺乳動物的組織或者細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。

2. 植物來源實(shí)驗(yàn)樣本，則可以選擇plantactin、Rubisco等。

3. 其他來源樣本研究較少，所以就應(yīng)該參照期刊文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參。

二、分子量大?。?/strong>