?

組織勻漿定義：將分化的細胞群用物理機械手段或其它方法，使細胞破碎，細胞內(nèi)容物釋放，與細胞碎片形成的固液混合形式的濃稠液體。

一、取適量組織塊，用預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.4）沖洗，去除表面殘留的血液與雜質(zhì)。（很多用戶疑惑，這個適量，到底是多少？ELISA試劑盒檢測中：血清或細胞上清樣本用量100μL/指標（單孔）；組織用量15mg/指標（單孔），差不多干枯綠豆大小。?）具體老鼠各器官大小可見下圖。

二、將組織塊稱重，再剪切成盡可能的小碎塊，以便充分勻漿；

三、可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入 5-10ml預冷PBS(組織與 PBS 的質(zhì)量體積比建議為 1:9，即1g 樣本加入 9ml PBS)進行充分研磨（有條件實驗室可選用機器勻漿），該過程需在冰上進行；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融進一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復凍融法可重復 2 次）。

玻璃勻漿器

超聲波細胞破碎儀

?

超聲波細胞破碎儀能用于多種動植物、病毒、細胞、細菌及組織的破碎，同時可用來乳化、分立、勻化、提取、消泡、清晰、納米材料的植被、分散及加速化學反應等，在醫(yī)學、軍事、工業(yè)、農(nóng)業(yè)上有很多的應用。

1、在破碎的過程中會大量的產(chǎn)熱，一般的都是冰浴下破碎；

2、切記空載，一定要將超聲變幅桿插入樣品后才能開機；

3、變幅桿（超聲探頭）入水深度：15mm左右，液面高度最好有25mm以上，探頭要居中，探頭不能碰到容器壁和底。超聲波是垂直縱波，插入太深不容易形成對流，影響破碎效率；

1）時間：超聲時間每次最好不要超過5秒，間隙時間應大于或等于超聲時間，以便于熱量散發(fā)。時間設(shè)定應以超聲時間短，超聲次數(shù)多原則，可延長超聲機子以及探頭的壽命；

2）超聲功率：不宜太大，以免樣品飛濺或起泡沫。如小于10ml樣品容量，功率應在200w以內(nèi)；10-200ml樣品容量的功率在200－400w；200ml以上的樣品容量功率在300-600w之間；

3）容器選擇：有多少的樣品就選多大的燒杯，這樣也是有利樣品在超聲中對流，提高破碎效率。例如；20ML的處理量最好用25ML的燒杯；

如10ml細胞勻漿樣品設(shè)置參數(shù):100W，60次，超聲3秒，間隙5秒 (總時間為8分鐘)。

5、若樣品放在1.5ml的EP管里請一定要將EP管固定好，以防冰浴融化后液面下降導致空載；

6、日常保養(yǎng)：用完后用酒精擦洗探頭或用清水進行超聲；

7、使用超聲波細胞破碎儀微探頭時，振幅調(diào)節(jié)不得超過70%，否則會造成探頭損壞。

四、將制備好的勻漿液于5000×g 離心 5分鐘，留取上清即可檢測。

五、如果樣本需要長期保存，請?zhí)砑拥鞍酌敢种苿８鶕?jù)實驗需要，組織勻漿樣本可先定量總蛋白，以便于統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)。某些組織樣本腎臟，腦組織會有假陽性反應。處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4℃保存應小于 1 周，-20 ℃不應超過 1 個月，-80℃不應超過3個月。在標本使用前應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解。

?